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本试剂盒适于从各种酵母样本高效而温和抽提可溶性总蛋白。过程简单方便，避免重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏，避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。

本试剂盒的所有组份均不含去垢剂成分，最后得到的蛋白样品的成分对NI柱纯化、分子筛、离子交换、亲和纯化等下游应用没有去垢剂影响。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。

• 蛋白得率远高于玻璃珠法。
  
• 使用方便，从酵母中提取蛋白不需经过研磨、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。

• 提取液制备：
  每500μL酵母蛋白提取液B中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 取酵母培养物，在4℃，2500×g条件离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
  
• 用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  
• 每100～200μL体积酵母沉淀物中加入300～500μL冷的酵母蛋白提取液A，混匀后，在室温或37℃条件下于摇床振荡1～2小时。
  注：若后面步骤中试剂B处理时沉淀难以裂解，应延长此步试剂A的处理时间。
  
• 在4℃，2000×g条件下离心5～10分钟，移除上清，收集沉淀。
  
• 在沉淀物中加入300～500μL冷的酵母蛋白提取液B，混匀后，在2～8℃条件下振荡30～45分钟。
  注：
  ● 试剂B处理后沉淀应明显减少，否则延长处理时间。
  ● 用振荡器/摇床的较低转速保持提取液晃动即可。
  ● 没有振荡器的话，在4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  
• 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。